溶酶体荧光探针染色与细胞自噬研究

本文深入探讨了溶酶体荧光探针LysoTracker在细胞生物学研究中的应用，尤其关注其在活细胞和*亡细胞染色方面的特性，以及在细胞自噬研究中的作用。LysoTracker作为一种酸性液泡指示剂，为研究细胞内环境和自噬过程提供了有力工具。

LysoTracker的特性与应用

一、LysoTracker的保存与使用

LysoTracker探针通常建议避光保存于-20摄氏度，在此条件下可稳定保存约半年。LysoTracker Red是一种红色荧光探针，专门用于活细胞溶酶体的特异性染色。使用时，可直接将其加入细胞培养基中进行染色，染色完成后用PBS缓冲液清洗，即可进行荧光显微镜观察。

二、活细胞染色与多色荧光

LysoTracker和Hoechst等荧光染料均可用于活细胞染色。LysoTracker通常发出红色或绿色荧光，而Hoechst则发出蓝色荧光，因此可以兼容使用，实现多色荧光成像。针对不同细胞类型，建议优化染料浓度和染色时间，以达到最佳染色效果。首次染色时，建议在荧光显微镜下间隔观察，或咨询有经验的研究人员。

三、*亡细胞染色特性

LysoTracker溶酶体荧光探针能够对*亡细胞进行染色。LysoTracker Red能够穿透细胞膜，因此既可用于活细胞，也可用于*亡细胞的溶酶体染色。

四、细胞自噬研究中的应用

在细胞自噬研究中，LysoTracker常与其他探针联合使用，以检测自噬过程中的关键事件。例如：

• LysoTracker：检测细胞内的酸性液泡，包括溶酶体和自噬体。
• pDsRed2-mito：表达红色荧光蛋白融合线粒体定位信号，用于检测线粒体自噬（Mitophagy）水平。
• MitoTracker：特异性标记活细胞中的线粒体，其荧光信号在固定后仍能保留。
• Hsp60：线粒体基质蛋白，在细胞凋*过程中通常不会释放，可作为线粒体完整性的指标。

通过这些探针的组合使用，研究人员可以更全面地了解细胞自噬的调控机制和生理功能。细胞自噬在维持细胞稳态、清除受损细胞器和应对外界压力方面发挥着重要作用。